fa طراحی، بهینه سازی و ساخت سازه ژنی کدکننده پروتئین اصلی میلین متصل به قسمت ایمونوژن توکسین کلرا تحقيقي Original Paper چکیده زمینه و هدف: مالتیپل اسکلروزیس یک بیماری خودایمن التهابی مزمن است. تزریق مخاطی پروتئین اصلی میلین متصل به قسمت ایمونوژن توکسین کلرا می تواند شدت پاسخ ایمنی در بیماران مالتیپل اسکلروزیس را کاهش دهد. برای تولید این پروتئین نوترکیب در مقیاس انبوه، انتخاب میزبان بیانی مناسب، نوع ترکیب بندی شاخص های پروتئینی، ساختار فضایی دو پروتئین در حالت متصل شده، بهینه کردن توالی نوکلئوتیدی از لحاظ سازگار بودن کدون های خوانش(CAI) و محتوایGC، بسیار حائز اهمیت می باشد. روش بررسی:در این مطالعه با استفاده از نرم افزارهای D‏NA2،PSIPRED و ProtParam بهترین حالت ممکن برای تولید پروتئین نوترکیب مورد ارزیابی قرار گرفت. علاوه براین، خوانش صحیح پروتئین اصلی میلین متصل به قسمت ایمونوژن توکسین کلرا نیز مورد توجه قرار گرفت. پس از حصول اطمینان ازکارآمدی قطعه کدکننده به روش نرم افزاری، قطعه کدکننده برای سنتز سفارش داده شد .به منظور ارزیابی قطعه طراحی شده آزمون تکثیرژنی با استفاده از پرایمرهایT7 انجام گرفت. درنهایت قطعه طراحی شده درمحل کلونینگ وکتور بیانی pET28 جای گرفت. یافته ها :بعداز بهینه سازی قطعه کدکننده مهندسی شده، میزان CAI از 64 درصد به 80درصد و محتوای GCاز 41درصد به 49 درصد ارتقا پیدا کرد. حضور باند حدود 700bp در الگوی الکتروفورز حاصل از بررسی وکتور نو ترکیب ساخته شده به روش تکثیرژنی، نشان دهنده کلونینگ صحیح قطعه مورد نظر درمحل کلونینگ وکتور بیانی pET28 می باشد. نتیجه گیری: مطالعات نرم افزاری و آزمایشگاهی نشان می دهد قطعه طراحی شده احتمالا در بهترین حالت ممکن قادر به کدکردن پروتئین نوترکیب مربوطه است. واژه های کلیدی: مالتیپل اسکلروزیس، توکسین کلرا، پروتئین اصلی میلین Abstract Background and Objectives: Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory autoimmune disease. Mucosal feeding of myelin basic protein binding to the cholera toxin B subunit can reduce the intensity of the immune response in MS patients. Expression system, the domain composition of the fusion protein, accessibility of two domains, codon adaptation index (CAI) and GC contents are very important for the large scale production of fusion protein. Material and Methods: we used DNA2, PSIPRED and ProtParam softwares for designing the best form to produce fusion protein. Moreover, the correct open reading frame of myelin basic protein was also considered. First the coding sequence was verified and then synthesized. For confirmation of the recombinant vector, PCR test was carried out using T7 primers. Finally it was inserted into the cloning site of pET28 expression vector. Results: After coding optimization, the CAI rate was increased from 64 % to 80% and GC content from 41 % to 49%. The presence of a band near 700bp resulted from PCR amplification test demonstrates the correct cloning of recombinant vectors in the cloning site of pET28 expression vector. Conclusion: According to software and experimental analysis, the designed sequence probably in the best form could be used for production of recombinant protein. Keywords: Multiple Sclerosis, Cholera Toxin, Myelin Basic Protein : مالتیپل اسکلروزیس, توکسین کلرا, پروتئین اصلی میلین Multiple Sclerosis, Cholera Toxin, Myelin Basic Protein 8 14 http://mlj.goums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-233&slc_lang=fa&sid=1 N Hashemi نادر هاشمی 10031947532846007338 10031947532846007338 No دانشکده فن آوری های نوین پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گلستان Y Yazdani یعقوب یزدانی yaghoubyazdani59@yahoo.com 10031947532846007339 10031947532846007339 Yes دانشگاه علوم پزشکی گلستان