fa طراحی و ساخت سازه ژنی کدکننده فاکتوررشد فیبروبلاستی-2 متصل به بخش ایمونودامیننت توکسین سودوموناس آئروژینوزا تحقيقي Original Paper چکیده زمینه و هدف: توقف رگ زایی تومور، رشد سلول‌های توموری را به طور قابل ملاحظه ای کاهش می‌دهد. در این میان پروتئین فاکتور رشد فیبروبلاست- 2 (bFGF) به ‌عنوان یک فاکتور رگ زایی مهم هدف مناسبی در مهار رگ زایی تومور و درمان سرطان است. هدف این مطالعه طراحی، ارزیابی و ساخت سازه ژنی نوترکیب در جهت بیان کارامد فیوژن پروتئینی است که دارای بخش های ایمونودامیننت توکسین سودوموناس همراه با bFGF است. روش بررسی: چگونگی حضور لینکرهای مختلف، بهینه‌سازی کدون های کد کننده اسیدهای آمینه و افزودن توالی سیگنال جهت افزایش ایمونوژنیسیته فیوژن پروتئین از جمله فاکتورهای مهم بوده که در این طراحی لحاظ گردیده است. پس از حصول اطمینان ازکارآمد بودن قطعه طراحی شده، قطعه نوکلئوتیدی کدکننده برای سنتز در وکتور کلونینگ pUC57 سفارش داده شد. سپس قطعه ژنی در سایت کلونینگ وکتور بیانی pET28-a قرار گرفت. با استفاده از آزمون های تکثیر ژنی و هضم آنزیمی وجود قطعه طراحی شده در وکتور بیانی مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: بهینه ‌سازی کدون های کد کننده سازه ژنی منجر به افزایش سازگاری کدون های خوانش از 69/0 به 83/0 شد. همچنین میزان محتوی GC (GC content)پس از بهینه‌سازی از61 به 77/54 کاهش یافت. حضور باند 1214 جفت بازی به روش تکثیرژنی و باند 1029 جفت بازی به روش هضم آنزیمی در الگوی الکتروفورز تأییدکننده فرایند صحیح کلونینگ می‌باشد. نتیجه گیری: براساس مطالعات صورت پذیرفته، این نخستین مطالعه در خصوص طراحی، ارزیابی و ساخت قطعه کد کننده مربوط به فیوژن پروتئینی است که واجد قطعات مربوط به دومین های ایمونودامیننت فاکتور رشد فیبروبلاست-2 و بخش ایمونودامیننت توکسین سودو است. واژه های کلیدی: رگ زایی تومور، بخش ایمونودامیننت توکسین سودوموناس ائروژینوزا، فاکتور رشد فیبروبلاست 2، نرم افزار DNA2 Abstract Background and Objective: the inhibition of tumor-associated angiogenesis can significantly reduce the tumor proliferation. The basic fibroblast growth factor (bFGF), an important angiogenic factor, is considered as a potential therapeutic target for cancer therapy. The purpose of this study was evaluating, designing and construction of new recombinant DNA molecule in order to have efficient expression of a fusion protein consisting of the bFGF and immunodominant epitopes of Pseudomonas toxin. Material and Methods: Different types of peptide linker, codon adaptation index (CAI) and adding signal peptide were considered in designing of immunogenic coding sequence. After software evaluation, the recombinant DNA molecule was ordered in the puc57 cloning vector. Then, coding sequence inserted into the multiple cloning site of pET28-a plasmid. Finally, PCR and enzymatic digestion tests were done for evaluation of recombinant expression vector. Results: Optimization of DNA sequence, codon adaptation index (CAI) increased from 0.69 to 0.83 and GC content decreased from 61 to 54.77. The presence of 1214-bp PCR product and 1029-bp one obtaining from enzymatic digestion confirmed the correction of the cloning process. Conclusion: According to the previous studies, it is the first work for designing, optimizing and synthesis of recombinant DNA consisting of bFGF and immunodominant epitopes of Pseudomonas toxin. Keywords: Tumor angiogenesis, immunodominant epitopres of Pseudomonas toxin, Fibroblast growth factor 2, DNA 2 software رگ زایی تومور, بخش ایمونودامیننت توکسین سودوموناس ائروژینوزا, فاکتور رشد فیبروبلاست 2, نرم افزار DNA2 Tumor angiogenesis, immunodominant epitopres of Pseudomonas toxin, Fibroblast growth factor 2, DNA 2 software 45 52 http://mlj.goums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-288&slc_lang=fa&sid=1 H Haghighatfard حمید حقیقت فرد dr.norozi@yahoo.com 10031947532846008583 10031947532846008583 Yes دانشگاه علوم پزشکی گلستان، دانشکده فن آوری های نوین Y Yazdani, Y. یعقوب یزدانی 10031947532846008584 10031947532846008584 No دانشگاه علوم پزشکی گلستان، دانشکده فن آوری های نوین